期刊简介
本刊创刊于1973年，是一本由卫生部主管的高级医学学术刊物，以报道肿瘤临床和基础理论方面的研究成果及新动态、新进展为主。读者对象为肿瘤防治研究工作者及相关专业的各级医务人员。
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首页>肿瘤防治研究杂志
- 杂志名称：肿瘤防治研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：湖北省卫生厅;中国抗癌协会;湖北省肿瘤医院
- 国际刊号：1000-8578
- 国内刊号：42-1241/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国学术期刊综合评价数据库来源期刊期刊收录：农业与生物科学研究中心文摘, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 剑桥科学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
抗CEA和CA19-9的单链抗体在HEK293细胞中的融合表达及亲和力鉴定
陆文斌；宫雪超；金建华；胡文蔚；王月；张华
关键词：癌胚抗原, CA19-9, 单链抗体, 亲和力
摘要：目的 在HEK293细胞中高效表达抗CEA scFv和抗CA19-9 scFv两种单链抗体的Fc融合蛋白(anti-CEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc),并测定两种单链抗体亲和力.方法 从GenBank中获取两种scFv基因序列;经优化后合成,并与pET32a(+)构成原核表达载体anti-CEA scFv/pET32a(+)和anti-CA1 9-9 scFv/pET32a(+),在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;两种scFv经PCR扩增技术删除末端终止序列,利用重叠区基因扩增法在anti-CEA scFv上游加入人IL-2信号肽,分别与含人IgG Fc段基因的pTT5载体(Fc/pTT5)构成真核表达载体(anti-CEA scFv(-t)-Fc/pTT5、IL2-anti-CEA scFv(-t)-Fc/pTT5和anti-CA19-9 scFv(-t)-Fc/pTT5);使用脂质体转染法,将3个重组质粒转入HEK293细胞中进行表达;产物经rProtein-A FF亲和层析纯化,竞争性细胞ELISA和Western blot检测.结果 免疫印迹显示,3个scFv-Fc融合蛋白均在HEK293细胞中表达;竞争结合实验表明,anti-CEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc的抗体浓度分别为8.2 nmol/L和6.0 nmol/L.结论 anti-CEA scFv和anti-CAl9-9 scFv能在HEK293细胞内表达;虽然表达量较低,但纯化后表达产物能够识别肿瘤细胞表面抗原CEA和CA19-9.
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