期刊简介
本刊创刊于1973年，是一本由卫生部主管的高级医学学术刊物，以报道肿瘤临床和基础理论方面的研究成果及新动态、新进展为主。读者对象为肿瘤防治研究工作者及相关专业的各级医务人员。
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首页>肿瘤防治研究杂志
- 杂志名称：肿瘤防治研究杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：湖北省卫生厅;中国抗癌协会;湖北省肿瘤医院
- 国际刊号：1000-8578
- 国内刊号：42-1241/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国学术期刊综合评价数据库来源期刊期刊收录：农业与生物科学研究中心文摘, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 剑桥科学文摘, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
rAAV-Slug-siRNA载体的构建及其抗胰腺癌的实验
崔海宁；余壮明；于飞；顾冠宏
关键词：Slug, 小干扰, 腺相关腺病毒, 胰腺癌, 凋亡
摘要：目的 构建并制备携带目的 基因的rAAV-EGFP Slug-siRNA(Slug-siRNA)病毒载体,探讨Slug 干扰抗胰腺癌作用.方法 首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316EGFP-Siuz-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收PCR产物;酶切pSNAV2.O-lacz-a载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5a,得到重组质粒pSNAV2.OEGFP-Slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定.建立载体细胞株BHK/Slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-Slug-siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定.将体外培养的胰腺癌细胞株AsPC-1转染Slug-siRNA和pSNAV2.O-EGFP空载体.Western blot及RT-PCR方法鉴定转染前后AsPC-1细胞内PUMA及Slug蛋白及mRNA表达,MTT、比色法检测细胞存活率,TUNEL检查细胞凋亡.结果 携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确.将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV7-rc/AUL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒Slug-siR-NA,经检测目的 片段插入成功,滴度为9.23×1010 (puf).Slug-siRNA有效抑制AsPC-1细胞内Slug表达,抑制体外细胞增殖,促进细胞凋亡,同时,伴随着Slug表达的下降,细胞内PUMA表达明显增加.结论 成功制备出高滴度携带目的 基因的Slug-siRNA病毒载体.干扰Slug表达抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能通过解除Slug时PUMA基因的抑制有关.
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